小鼠抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)elisa試劑盒說明書

點擊次數：884 發布時間：2016/6/17 14:36:23

· 上傳者：上海極威生物科技有限公司

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· 資料簡介：小鼠抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：15ng/L -480ng/L

使用目的：

本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關液體樣本中抗雙鏈DNA 抗體(dsDNA)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中小鼠抗雙鏈DNA 抗體(dsDNA)水平。用純化的

抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入抗雙鏈DNA 抗體(dsDNA)，再

與HRP 標記的抗原結合，形成抗原-抗體-抗原復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB 顯色。

TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣

品中的抗雙鏈DNA 抗體(dsDNA)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），

通過標準曲線計算樣品中小鼠抗雙鏈DNA 抗體(dsDNA)濃度。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶

2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品（960ng/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份

5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張

6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

480ng/L 5 號標準品150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

240ng/L 4 號標準品150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

120ng/L 3 號標準品150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

60ng/L 2 號標準品150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

30ng/L 1 號標準品150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，

然后再加待測樣品10μl（樣品*終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此

重復5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止

液后15 分鐘以內進行。

操作程序總結：

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，

即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值

大于標準品孔孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計

算時請*后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月

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