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· 資料簡(jiǎn)介： HOK 人正常口腔角質(zhì)細(xì)胞 Catalogue No.: C1366 Product Format: a T25 flask Culture Properties：貼壁 Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗 Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Application: Cells ａnd cancer research NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY. Components Item Specifications a T25 flask 2X106 Manual 1 copy Operation steps for cell culture 1. 吸走用于培養(yǎng)基，加入 3-5mL PBS 后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞； 2. 吸干凈 PBS 后加入 1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒(méi)細(xì)胞表 面，培養(yǎng)瓶放 37 度培養(yǎng)箱消化； （細(xì)胞對(duì)于消化比較敏感，消化過(guò)度會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài)，導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或 者傳代后不長(zhǎng)。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時(shí)即可終止，禁止 消化到細(xì)胞完全漂浮。混勻細(xì)胞時(shí)盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。） 3. 加入 6-8ml 完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細(xì)胞混勻； 4. 將混勻的細(xì)胞 1000rpm（約 150g）離心 3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸 37 度培 養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)； 傳代比例: 不同細(xì)胞生長(zhǎng)速度不一，具體傳代比例視細(xì)胞生長(zhǎng)速度而定，大部分細(xì)胞適用 1:3-1:4 傳代，生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞可以 1:2 傳代。 Cell cryopreservation 1.凍存液：92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇） 2.降溫步驟：4 度 10min，-20 度 2h，-80 過(guò)夜后液氮保存。Tips： 1. 細(xì)胞經(jīng)過(guò)運(yùn)輸后，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。貼壁細(xì)胞 可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900-1000rpm(約 150g)離心 3min，棄上清。加 5ml PBS 重懸細(xì)胞，再 900-1000rpm(約 150g)離心 3min，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培 養(yǎng)瓶。第二次 PBS 重懸是為了去除碎片，如果平時(shí)碎片比較少，傳代時(shí)可以省略 PBS 重懸的步 驟；如果碎片很多，建議 PBS 多洗幾次。 2. 細(xì)胞生長(zhǎng)不均時(shí)，可以將細(xì)胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。 3. 細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢時(shí)，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（不超過(guò) 20%），也可以根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)， 選擇傳代細(xì)胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。 4. 不同細(xì)胞貼壁性差異比較大，所以消化時(shí)間差別較大，20s-10min 均有可能，具體以細(xì)胞消化到 相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準(zhǔn)，嚴(yán)禁消化到細(xì)胞完全漂浮。客戶消化過(guò)度導(dǎo)致細(xì)胞死 亡、漂浮、生長(zhǎng)緩慢，不提供免費(fèi)售后服務(wù)。 5. 干冰發(fā)貨均為兩支，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若 客戶同時(shí)復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳，我方不提供免費(fèi)售后服務(wù)。 6. 細(xì)胞狀態(tài)正常時(shí)，應(yīng)盡快凍存細(xì)胞保種，凍存后應(yīng)隨機(jī)抽取一支檢測(cè)凍存效果。我方不對(duì)客戶凍 存細(xì)胞導(dǎo)致死亡負(fù)責(zé)，客戶凍存細(xì)胞死亡不提供免費(fèi)售后服務(wù)。 Notice：客戶收到細(xì)胞有任何疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)致電我們，細(xì)胞收到后 1 周內(nèi)沒(méi)有任何電話，或其他形式回訪， 默認(rèn)為細(xì)胞質(zhì)量沒(méi)問(wèn)題，之后出了任何問(wèn)題不給予免費(fèi)售后。細(xì)胞免費(fèi)售后只提供一次，若重發(fā)后再 次培養(yǎng)死亡不再免費(fèi)補(bǔ)發(fā)，細(xì)胞收貨時(shí)已經(jīng)死亡或密度不足的除外。
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