禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞

點擊次數：730 發布時間：2020/11/9 14:19:00

· 上傳者：上海極威生物科技有限公司

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· 資料簡介：

11月9日報道，關于禽流感病毒（AIV）elisa試劑盒說明書@公司新聞介紹稱，本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫學診斷，檢測原理試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被禽流感病毒抗體的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中禽流感病毒（AIV）的存在與否。

禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，樣品收集、處理及保存方法：

1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于 -20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，自備物品：

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，操作步驟：

1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2. 設置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各 50μL； 3. 待測樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；

4. 隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。

禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，結果判斷：

1. 試驗有效性：陽性對照孔 OD 值平均值≥1.00；陰性對照孔 OD 值平均值≤0.15。

2. 臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3. 陰性判斷：樣品 OD 值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4. 陽性判斷：樣品 OD 值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，試劑盒性能：

準確性：陽性對照孔 OD 值平均值≥1.00；陰性對照孔 OD 值平均值≤0.15，說明試驗禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，結果有效。

1. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

2. 重復性：板內、板間變異系數均小于 15%。

3. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

4. 有效期：6 個月

禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，免責聲明：

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。

2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。

ELISA試劑盒用戶：為什么酶標儀讀數時必須選用雙波長？

極威生物解答：首先，酶標儀使用前務必預熱10-15min，使測讀結果更穩定。其次，ELISA實驗采用雙波長測定吸光度，可以排除單波長檢測時的測定干擾（標本的濃度，干擾色等）。一般采用波長作為參照波長，在參照波長下，檢測物的吸光值*小，檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收；因此，雙波長測定，可限度的消除指紋、雜質及不透光的物質對酶標儀讀數帶來的誤差，以保證實驗數據的準確度。

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