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· 上 傳 者： 上海極威生物科技有限公司
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· 所屬分類：應(yīng)用方法
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· 資料簡介：
活體細(xì)胞線粒體內(nèi)膜功能（膜電位）熒光測定試劑是一種旨在通過高度敏感的陽離子熒光羰花青染料結(jié)合到線粒體基質(zhì)，其熒光的增強(qiáng)或減弱說明線粒體膜電位的變化，即內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低，來分析線粒體內(nèi)膜功能的完整性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種線粒體制備物的功能檢測。可以被用于細(xì)胞凋亡、信號傳遞、衰老等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，活體檢測，操作極為簡易，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
陽離子熒光羰花青染色劑JC-1（5,5＇,6,6＇-tetrachloro-1,1＇,3,3＇-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide）是一種對膜電位高度敏感的染色劑。它特異性地進(jìn)入線粒體，分布和結(jié)合在線粒體基質(zhì)上。線粒體膜電位的高低變化決定了JC-1的分布濃度。電位高，JC-1形成聚集體，而濃度高，熒光顯色為紅色或桔紅色；反之，則為綠色。熒光減弱表明線粒體內(nèi)膜功能受到損害。
產(chǎn)品內(nèi)容
染色液（Reagent A） 微升
稀釋液（Reagent B） 毫升
清理液（Reagent C） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存清理液（Reagent C）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent A）避免光照；有效保證6月
用戶自備
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于細(xì)胞脫離
完全細(xì)胞培養(yǎng)液（G&VS12052）：用于細(xì)胞脫落收集
1.5毫升離心管：用于活體細(xì)胞線粒體染色的容器
微型臺式離心機(jī)：用于細(xì)胞收集的操作
培養(yǎng)箱：用于染色孵育
（共聚焦）熒光顯微鏡：用于活體細(xì)胞線粒體熒光定性分析
比色皿或96孔板：用于熒光定量分析的容器
熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀：用于活體細(xì)胞線粒體熒光定量分析
細(xì)胞流式儀：用于活體細(xì)胞線粒體熒光分析
實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent A）置入冰槽里融化，稀釋液（Reagent B）放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出xx微升染色液（Reagent A）到新的1.5毫升離心管，加入xx微升稀釋液（Reagent B），混勻后，在冰槽里靜置，并標(biāo)記為染色工作液，放在暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
一、直接法
1． 準(zhǔn)備1個12孔細(xì)胞培養(yǎng)板的待測細(xì)胞，每孔鋪滿率達(dá)70％（約30萬細(xì)胞數(shù)）
2． 小心抽去細(xì)胞培養(yǎng)液
3． 輕輕沿著孔壁加入xx毫升 清理液（Reagent C）到細(xì)胞培養(yǎng)孔，覆蓋培養(yǎng)孔表面
4． 小心抽去xx毫升 清理液（Reagent C）
5． 加入xx微升含有染色液（Reagent A） 和稀釋液（Reagent B）的染色工作液，覆蓋培養(yǎng)孔表面
6． 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里，孵育20分鐘（注意避光）
7． 小心抽去xx微升染色工作液
8． 小心加入xx微升清理液（Reagent C）（注意：檢測前置于冰槽里）
9． 即刻在倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察（單濾波或雙濾波）：
二、間接法
1． 準(zhǔn)備1個12孔細(xì)胞培養(yǎng)板的待測細(xì)胞，每孔鋪滿率達(dá)70％（約30萬細(xì)胞數(shù)）
2． 小心移出細(xì)胞培養(yǎng)液到15毫升錐形離心管（收集懸浮細(xì)胞）
3． 加入xx毫升 清理液（Reagent C）到細(xì)胞培養(yǎng)孔，覆蓋培養(yǎng)孔表面
4． 小心移出xx毫升 清理液（Reagent C）到15毫升錐形離心管（收集洗脫細(xì)胞）
5． 加入500微升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個培養(yǎng)孔表面
6． 置入37℃培養(yǎng)箱1分種
7． 輕輕抖動培養(yǎng)板，使細(xì)胞脫落，然后加入1毫升完全細(xì)胞培養(yǎng)液
8． 移入15毫升錐形離心管
9． 放進(jìn) 臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx微升清理液（Reagent C）
12． 用200微升槍頭上下輕柔抽吸，混勻細(xì)胞顆粒群
13． 轉(zhuǎn)入到1.5毫升離心管或細(xì)胞流式儀專用測試管
14． 加入xx微升含有染色液（Reagent A） 和稀釋液（Reagent B）的染色工作液
15． 輕度渦旋震蕩2秒
16． 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里，孵育20分鐘（注意避光）
17． 放進(jìn) 臺式微型離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
18． 小心抽去上清液
19． 加入xx微升清理液（Reagent C）（注意：檢測前置于冰槽里）
上海極威生物科技有限公司（Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.）成立于上海，主營產(chǎn)品有elisa試劑盒，大鼠elisa試劑盒，小鼠elisa試劑盒，動物血清，細(xì)胞株，標(biāo)準(zhǔn)品，生化試劑盒等。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)有酶聯(lián)免疫ELISA檢測、生化測試、液相氣相檢測、Icp-MS測試、載體構(gòu)建、RACE、全基因合成、線粒體測序、熒光定量PCR、基因克隆、定點(diǎn)突變、染色體步移、基因組全序列獲取、環(huán)境微生物多樣性、微生物基因組測序、微生物菌種鑒定、甲基化分析服務(wù)等。極威生物秉承以產(chǎn)品質(zhì)量為根本，以市場需求為導(dǎo)向，以為客戶創(chuàng)造價值為己任的精神，致力于發(fā)展中國的科研事業(yè)。
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